Zastosowanie spektrofotometrii UV, Analiza leków
[ Pobierz całość w formacie PDF ]
Zastosowanie spektrofotometrii UV-VIS
Analiza ilo
ś
ciowa
oparta jest na pomiarze absorbancji a badanego roztworu przy określonej
długości fali i wykorzystaniu zaleŜności prawa Lamberta-Beera
A=εcl
Dobór optymalnych warunków oznaczenia:
•
Dobór odpowiedniego przyrządu, kontrola jego sprawności i kalibracja zgodnie z
instrukcją
•
Przygotowanie próbek do pomiaru
O
Roztwór musi być jednorodny (zgodnie z prawem Lamberta-Beera)
O
Dobrany rozpuszczalnik nie moŜe absorbować promieniowania w badanym
zakresie widma
O
Środowisko powinno zapewnić trwałość analizowanej próbce w czasie
pomiaru
O
Pomiar wykonywać przy optymalnym pH
•
Dobór odczynnika kompleksującego w przypadku gdy oznaczamy kationy metali w
postaci barwnych związków chylatowych
O
Odczynnik jak i wytworzony chylat musi być trwały w czasie i dobrze
rozpuszczalny w stosowanym rozpuszczalniku
O
Pasmo absorpcji odczynnika nie moŜe pokrywać się z pasmem absorpcji
kompleksu
O
Reakcja kompleksowania musi być selektywna, a nawet specyficzna względem
analizowanego metalu
O
Barwny kompleks musi spełniać prawo Lamberta-Beera
O
Powstały kompleks powinien mieć duŜy ε
Odczynnik
λ
max
[nm]
ε
max
[dm mol
-1
cm
-1
]
(CuSO
4
)
aq
800
20
Cu(NH
3
)
4
2+
600
80
Cu-DEDC
436
10 000
ε
max
determinuje dolna granicę oznaczalności danego składnika.
Wartości ε dla metod
czułych
wynoszą powyŜej 10 000 dm
3
mol
-1
cm
-1
, a współczynnik ε o wartościach poniŜej 1000 dm
3
mol
-1
cm
-1
odpowiada metodom mało czułym.
Wybór analitycznej długo
ś
ci fali
(długość fali przy której mierzy się absorbancję uŜywana
następnie w oznaczeniach ilościowych danego składnika).
Najczęściej do oznaczeń ilościowych wybiera się długość fali odpowiadającą najbardziej
intensywne pasmo absorpcji czyli λ
max
(tylko jeden składnik roztworu). JeŜeli w przypadku
chylatu absorbuje równieŜ odczynnik chelatujący, wybieramy optymalną długość fali λ
optym
przy której obserwujemy równieŜ róŜnicę absorpcji między analizowanym związkiem a
odczynnikiem.
1
A
A
λ
optymalne
λ
max
λ[nm]
λ
1
λ
2
λ[nm]
Przy wyborze analitycznej długości fali naleŜy takŜe brać pod uwagę absorbcję
rozpuszczalnika. Wybór analitycznej długości fali rzutuje na przebieg krzywej kalibracyjnej.
Obydwie krzywe maja przebieg liniowy, ale nachylenie krzywej przy 500nm jest znaczenie
mniejsze, a zatem czułość oznaczania jest równieŜ mniejsza.
Metody oznaczania pojedynczego składnika:
•
Porównanie z pojedynczym wzorcem- np. kolorymetr Dubosqa
•
Porównanie z kilkoma wzorcami (metoda krzywej wzorcowej)
A
A
x
C
x
C[mol/dm
3
]
2
•
Dodatku wzorca- procedura oznaczenia sprowadza się do pomiaru absorbancji A
0
próbki badanej o stęŜeniu C
x
i absorbancji A
i
próbki badanej o stęŜeniu
C
x
z dodatkiem
wzorca C
wz
.Metoda ta moŜe być stosowana tylko w przypadku, gdy w badanym
zakresie występują prostoliniowe zaleŜności A=f(c):
O
Metoda jednokrotnego dodania wzorca
•
Metoda wielokrotnego dodawania wzorca (stęŜenie analizowanej próbki odczytujemy
z krzywej wzorcowej)
A
n
A
0
0
C-stęŜenie po n-tym dodaniu wzorca
•
Miareczkowanie spektrofotometryczne
3
Analiza jakościowa
- elektronowe widmo absorpcyjne jest cechą charakterystyczną związki
chemiczne i określa jednoznacznie związek jednorodny.
A=f(λ)
ε= f(λ)
logA= f(λ)
logε= f(λ)
Porównanie otrzymanego charakterystycznego widma z widmem literaturowym pozwala na
identyfikacje związku. W przypadku związków organicznych widma w zakresie 180-800nm
stosuje się do ustalania pewnych zaleŜności strukturalnych i identyfikacji grup funkcyjnych
•
Chromofory grupy absorbujące promieniowanie elektromagnetyczne w zakresie 180-
800nm
•
Auksochromy – grupy przesuwające promieniowanie elektromagnetyczne w kierunku
fal dłuŜszych (przesunięcie parochromowe) np. –NH
2
Zastosowanie spektrofotometrów UV –Vis
Spektrofotometria UV–VIS naleŜy do najczęściej wykorzystywanych metod instrumentalnych
w analizie ilościowej.
Główne zalety tej metody,
to:
a) Dobra czułość
b) Dobra precyzja oznaczeń
c) Selektywność oznaczeń
A oto kilka przykładów takich zastosowań
:
1) W analizie ilościowej kationów metali
2) W analizie ilościowej anionów nieorganicznych
3) W analizie ilościowej związków organicznych
4)Do badań równowag reakcji chemicznych
Spektrofotometrię UV –Vis wykorzystuje się w szczególności do:
a) wyznaczania stałych dysocjacji kwasów i zasad,
b) ustalania składu i stałych trwałości związków kompleksowych
.
4
[ Pobierz całość w formacie PDF ]